細胞名稱：小鼠黑色素瘤細胞B16F0ATCC

細胞代次：P4

細胞規格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。

原代細胞與細胞系有什么區別？細胞培養物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。實際上，連續細胞系可以用大量次培養基培養，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

1、倍增和代數有什么區別？倍增是培養物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養？推薦有經驗者在無菌環境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養的初學者或打算建立細胞培養實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養專家。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

二）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定。

YS4437C人腦膠質瘤細胞Hs 683

YS4438C小鼠黑色素瘤細胞B16

YS4439C人子宮內膜癌細胞；RL95-2

YS4440C大鼠肝星形細胞HSC-T6

YS4441C人肺成纖維細胞HFL-1

YS4442C腦星形細胞瘤SW1088

YS4443C肝癌細胞SNU878

YS4444C肝癌細胞SNU423

YS4445C胰腺腺癌細胞Panc03.27

YS4446C人腦髓母細胞瘤細胞D283 Med

YS4447C非洲綠猴腎成纖維細胞（SV40轉化）COS7

YS4448C小鼠肝癌細胞H22

YS4449C乳腺癌細胞HCC1187

YS4450C小鼠黑色素瘤細胞B16F0

YS4451C小鼠單核巨噬細胞J774A.1

YS4452C人骨髓基質細胞HS-5

YS4453C人非小細胞肺癌細胞系NCI-H322

YS4454C人膽管癌細胞HUH-28

YS4455C頜下腺鱗癌細胞A253

YS4456C嗜酸性粒細胞白血病細胞株EOL-1

YS4457C骨髓細胞系IDG-SW3

YS4458C人卵巢畸胎瘤細胞 PA-1

YS4459C人腎透明細胞癌Caki-1

YS4460C急性早幼粒細胞株NB4

YS4461C人卵巢癌細胞UWB1.289

YS4462C人食道癌腫瘤細胞TE10

YS4463C肺癌細胞（混合）HCC2279

YS4464C急變期慢性粒細胞白血病LAMA84

YS4465C乳腺原發性導管癌HCC1599

YS4466C結腸癌細胞細胞GP2d

YS4467C小鼠肝癌細胞Hepa1c1c7

YS4468C急性單核細胞白血病細胞MonoMac6

YS4469C大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6

YS4470C人皮膚黑色素瘤細胞SK-MEL-1

YS4471C人甲狀腺髓樣癌細胞TT

YS4472C急性髓系白血病OCI-AML-2

YS4473C急性髓細胞白血病OCI-AML-5

YS4474C人乳腺癌細胞MDA-MB-157

YS4475C乳腺癌細胞HCC1569

YS4476C人食管癌細胞TE-1

YS4477C人宮頸癌腸轉移細胞Ca Ski

YS4478C大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞PC12低分化

YS4479C大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞（未分化）PC-12

YS4480C舌頭鱗癌細胞UPCISCC090

YS4481C金倉鼠腎成纖維細胞BHK21

YS4482C人腎癌細胞A498

YS4483C人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087

YS4484C小鼠腦微血管內皮細胞株bEnd.3

YS4485C人肺鱗癌細胞NCI-H2170

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